Определение мочевины в моче и сыворотке

МОЧЕВИНА

Содержание:

1. Группы методов определения содержания мочевины
2. Определение мочевины в сыворотке крови и моче с диацетилмонооксимом
3. Определение мочевины уреазным методом
4. Нормальные величины
5. Влияющие факторы
6. Клинико диагностическое значение
1. Сыворотка
2. Моча

Основные группы методов определения содержания мочевины подразделяют на:

•         Ксантгидроловые: гетероциклический спирт ксантгидрол вступает в реакцию с мочевиной и образует нерастворимую диксантилмочевину, которую в дальнейшем определяют гравиметрически, нефелометрически, колориметрически или титрометрически. Методы точны, но трудоемки.

 

•         Гипохлоритные – метод Б.А.Рашкована, состоящий в появлении характерной окраски при взаимодействии мочевины с гипохлоритом натрия и фенолом, практически не применяется из‑за разного оттенка опытных и контрольной проб, частого появления мути при добавлении HCl.

 

•         Диацетилмонооксимные методы основаны на реакции Фирона – взаимодействии мочевины и диацетилмонооксима с образованием окрашенных продуктов, отличаются хорошей воспроизводимостью, высокой чувствительностью, большой специфичностью.

 

•         Полуколичественные методы с использованием индикаторной бумаги.

 

•         Методы с использованием ионоселективных электродов.

 

•         Ферментативные методы базируются на гидролизе мочевины уреазой (оптимум pH 6,0‑8,0). Образовавшийся аммиак определяют с помощью различных реакций (фенолгипохлоритная, с помощью глутаматдегидрогеназы, салицилатно‑гипохлоритная).

 

•         Газометрические (гипобромитные), основаны на окислении и разложении мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде:

CO₂(NH₂) + 3NaBrO → N₂ + CO₂ + 3NaBr + H₂O

 

Выделяющуюся углекислоту поглощает раствор, свободным остается только азот, объем которого измеряют. Метод неспецифичен (так как гипобромит реагирует не только с мочевиной, но и другими веществами, содержащими аминогруппы), неточен, плохо воспроизводим и трудоемок.

В качестве унифицированных методов определения мочевины утверждены фенолгипохлоритный, диацетилмонооксимный и уреазный методы, экспресс‑метод с использованием индикаторной бумаги "Уреатест".

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И МОЧЕ С ДИАЦЕТИЛМОНООКСИМОМ

Методы этой группы основаны на реакции Фирона, протекающей в два этапа. 

Первый этап заключается в гидролизе диацетилмонооксима с образованием диацетила и гидроксиламина.

На втором этапе гидроксиламин взаимодействует с мочевиной с образованием окрашенного диазинового производного. Для окисления гидроксиламина могут применяться: персульфат натрия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, феназон, катионы. Для интенсификации окраски и ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан, нитриты.

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ УРЕАЗНЫМ МЕТОДОМ

Ферментативные методы базируются на гидролизе мочевины уреазой в инкубационной среде с pH=6,0‑6,5 (ЭДТА‑буфер) или pH=6,9‑7,0 (фосфатный буфер) на углекислый газ и аммиак. Образовавшийся аммиак можно определить по высокочувствительной и специфичной реакции с фенолгипохлоритом и катализатором нитропруссидом, по салицилатно‑гипохлоритной реакции, по реакции с реактивом Несслера (является в 10 раз менее чувствительной по сравнению с фенолгипохлоритной, малоспецифична), по дихлоризоциануратной реакции (наличие белка мешает определению).

 

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ

При необходимости сопоставления концентрации остаточного азота с содержанием азота мочевины концентрацию последней следует разделить на 2,14.

 

ВЛИЯЮЩИЕ ФАКТОРЫ

·         in vivo: увеличение — нефротоксичные препараты, кортикостероиды, избыток тироксина; снижение – увеличение концентрации соматотропного гормона,

·         in vitro: снижение (метод с уреазой) – цитрат натрия.

 

КЛИНИКО‑ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

 

СЫВОРОТКА

Уровень мочевины зависит от скорости ее синтеза в печени и выделения через почки, а также от величины белкового катаболизма.

Повышение уровня мочевины может наблюдаться при нарушении функции почек (острые и хронические заболевания, обтурация мочевых путей), нарушении почечной перфузии (застойная сердечная недостаточность), истощении запасов воды в организме (рвота, понос, повышенный диурез или потоотделение), повышенном катаболизме белка (острый инфаркт миокарда, стресс, ожоги, желтая атрофия печени, желудочно‑кишечные кровотечения), при диете с высоким содержанием белка. В тяжелых случаях острой почечной недостаточности выявлено 10‑кратное возрастание уровня мочевины. Так как водовыделительная функция почек восстанавливается быстрее, чем концентрационная способность, то нормальное выделение мочевины с мочой наступает значительно позднее, чем восстановление диуреза.

Снижение отмечается при диете с низким содержанием белка, при повышенной утилизации белка в тканях (поздние сроки беременности), тяжелых заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением синтеза мочевины (паренхиматозная желтуха, цирроз печени).

 

МОЧА

Повышение количества мочевины в моче связано с гипертиреозом, злокачественной анемией, лихорадкой, при отравлении фосфором, отмечается при диете с высоким содержанием белка, в послеоперационном периоде.

Снижение наблюдается у больных с нефритом и другими заболеваниями почек, уремией, паренхиматозной желтухой, циррозом или дистрофией печени, также у здоровых растущих детей и при низкобелковой диете. 

Дополнительная литература:

1. Биохимический практикум